Il cioccolato fonde tra 30 e 36 °C. Per stabilire la soglia di fusione indotta dal laser è stato utilizzato cioccolato al 100%, grazie al suo colore più scuro. Il campione più scuro assorbe più luce laser e, di conseguenza, fonde a potenze inferiori e con tempi di esposizione più brevi.

L'ottimizzazione della potenza del laser è fondamentale per prevenire danni termici o alterazioni strutturali durante la misurazione. Gli spettri Raman raccolti al 5%, 10% e 15% di potenza laser hanno rivelato notevoli variazioni nei picchi correlati al cacao (Figura 4a), con una fusione visibile al 10%. I cioccolati di colore più chiaro hanno tollerato potenze più elevate, generalmente fino al 15%.

Tuttavia, la fusione non è l'unico indicatore di cambiamenti strutturali indotti dal calore. Anche il cioccolato bianco ha mostrato lievi variazioni di cristallinità nell'intervallo 1060-1100 cm⁻¹ quando la potenza del laser superava il 10% (Figura 4b). Questi risultati evidenziano che il cioccolato può subire alterazioni termiche a potenze laser relativamente basse, sottolineando la necessità di un'attenta selezione della potenza durante il controllo qualità (QA/QC). I metodi di reiezione della fluorescenza combinati con l'eccitazione a 785 nm a bassa potenza offrono potenziali soluzioni.

I picchi principali di zucchero sono chiaramente osservati nei cioccolati bianco, al latte e al 70% (Figura 5). Tuttavia, nel cioccolato all'85%, l'unica caratteristica spettrale evidente correlata allo zucchero appare a 1460 cm⁻¹. Ciò suggerisce che la tecnica Raman determini efficacemente il contenuto di zucchero per le misurazioni di controllo qualità. Gli ingredienti correlati al cacao presentano bande Raman caratteristiche intorno a 1300 cm⁻¹ e 1420–1480 cm⁻¹. Limitando un modello ai minimi quadrati parziali (PLS) a queste regioni spettrali si è ottenuto il modello predittivo più accurato per l'analisi del contenuto di cacao.

I modelli PLS costruiti a partire da picchi chiave tra 1200 e 1600 cm⁻¹ negli spettri Raman di vari tipi di cioccolato mostrano una forte concordanza tra il contenuto di cacao previsto e quello misurato, con un basso errore standard. Ciò conferma l'efficacia della spettroscopia Raman per l'analisi di routine del contenuto di cacao (Figura 6a). L'aggiunta di punti dati aumenterebbe l'affidabilità delle previsioni a livelli di cacao più elevati.

Il modello del contenuto di zucchero dimostra un'accuratezza predittiva ancora maggiore, attribuibile a picchi di zucchero distinti e all'assenza di variazioni legate alla temperatura nelle misurazioni dello zucchero. I dati sullo zucchero possono anche affinare le previsioni del contenuto correlato al cacao, poiché l'intensità Raman dello zucchero varia proporzionalmente al contenuto di cacao (Figura 6b). Sia lo zucchero che il contenuto di cacao sono importanti parametri di controllo qualità misurabili tramite spettroscopia Raman.